Fragen zu einfacher Floureszenz mit Auflichtilluminator

Siegfried · Dezember 02, 2023, 13:23:13 NACHMITTAGS

Hallo zusammen
Wie ich ja schon in meinem Thread zum Carl Zeiss Jena Ergaval geschrieben habe, versuche ich momentan mit dem dazugehörigen Auflichtilluminator einfache Fluoreszenzanwendung zu realisieren.
Habe mich auch schon etwas belesen, aber etwas Entscheidenes über genaue Filterbezeichnungen habe ich nicht gefunden. Welcher Sperrfilter 4 (genaue Bezeichnung)

Bild aus Wikipedia. https://de.wikipedia.org/wiki/Fluoreszenzmikroskopie

wird für 455nm oder 405nm benötigt. Momentan sehe ich ohne Sperrfilter nur blau. Will aber zB. das Chlorophyll zB. rot sehen. Ich weiss, Filterwürfel usw. ist eine Antwort, aber ich will es ja mit einfachen Mitteln realisieren. Da gibt es doch bestimmt genaue Bezeichnungen für einzulegende Sperrfilter oberhalb des Auflichtilluminators. Über Antworten würde ich mich freuen.
Gruß von Siegfried

Aljoscha · Dezember 02, 2023, 13:59:50 NACHMITTAGS

Hallo Siegfried,

Du benötigst einen Langpass-Filter im gelbgrünen Bereich. Zum Experimentieren empfehle ich das Filterset von Lee:

https://www.musicstore.de/de_DE/EUR/Lee-Farbfilter-Musterheft-Designers-Edition/art-LIG0006577-000?campaign=GShopping/DE&ProgramUUID=rrLAqJarLjMAAAFl.gZyjI8h&gad_source=1&gclid=EAIaIQobChMIsqWuw-XwggMVLY6DBx3VdQ9DEAQYASABEgJ65fD_BwE

Da sind Filter über das gesamte Farbspektrum drin und zu jedem Filter sind die optischen Daten dabei.

Hochwertige Sperrfilter gibt es bei Edmund oder Optima. Die gehen dann etwas ins Geld. Am Gebrauchtmarkt findet man immer wieder mal Filterschieber mit 570 oder 590 nm Kantenfrequenz. Die taugen oft auch für den Job.

Viele Grüße

Alexander

Jürgen Boschert · Dezember 02, 2023, 14:09:48 NACHMITTAGS

Hallo Siegfried,

hast Du auch bei mikroskop-online.de nachgesehen? Da findet man eigentlich alle nötigen Angaben in der Anleitung zum Fluoval:
http://www.mikroskop-online.de/Mikroskop%20BDA/30-549-1%20%20FLUOVAL%202.pdf

peter-h · Dezember 02, 2023, 14:13:43 NACHMITTAGS

Hallo,

Sperrfilter sind ganz wichtig ! Aber vorsicht. Die Schott Farbglasfilter haben in diesem Bereich eine Eigenfluorezenz. Siehe Bild.
Besser geeignet sind Folienfilter. Es kommt aber auch auf die Anregung und den Farbteiler an.

Grüße
Peter

Siegfried · Dezember 02, 2023, 16:31:17 NACHMITTAGS

Hallo Alexander, Jürgen und Peter
Vielen Dank für euere sehr hilfreichen Antworten und die Links. Hier wird einem geholfen. Ich werde wieder berichten, wenn ich auch Dank euerer Hilfe Fortschritte gemacht habe.
lg von Siegfried

3nzo · Dezember 02, 2023, 22:47:21 NACHMITTAGS

Hallo Siegfried,
Ich habe bescheidene Ergebnisse mit der Fluoreszenz von Chlorophyll in blauem Licht erhalten, jedoch nur bei Licht übertragen, da ich keine Messung der Messung für den Arm für reflektiertes Licht habe. Ich schrieb in der Vergangenheit im Forum dieser Versuche.
Ich habe eine blau-Valetto-LED als Lichtquelle und einen Aufregungfilter B421G verwendet (ohne dies funktioniert es nicht). Als Barrierefilter zementiert ein OG4/GG9 -Filter.
Das Bild war nur durch Kamera mit langer Belichtungszeit sichtbar.
Meine Ausrüstung von drei Aufregungfiltern umfasst auch eine für UV ILU204 und einen KP425 (Kurpaβ-Filter), von dem ich das Gebrauchsfeld nicht kenne.
Wer kann mir sagen, wofür der KP425 -Aufregungfilter ist?
Beste grüße.

Enzo

Siegfried · Dezember 03, 2023, 08:28:44 VORMITTAG

Hallo Enzo
Auch dir danke, für deine Hinweise. Muß mich jetzt erst mal sammeln, bei den vielen Filterbezeichnungen, wie
OG4/GG9 -Filter usw. Aber werde schon irgendwann durchsteigen.
Gruß von Siegfried und schönen 1. Advent für Alle

mikropit · Dezember 03, 2023, 19:51:52 NACHMITTAGS

Fragen an die Experten
Ich verstehe das nicht ganz. Die Schemazeichnung gilt doch, wenn die Lichtquelle eine Quecksilberdampflampe ist.
Wenn man aber schon eine LED Lichtquelle (Blaulicht) hat, zu welchem Zweck dient das Anregungsfilter?
Ich habe ja schon die richtige Lichtwellen Frequenz.
Das sind ja wohl ca. 97 % welche man wegfiltern muss. Selbst wegen dem Streulicht braucht man noch eine Blende für den Augenschutz. Die blaue LED hat aber nur wenige Watt und kaum andere Wellenlängen, welche das Auge schädigen können. Was soll dann das Sperrfilter wegfiltern?
Bei UV - LEDs ist die Sache natürlich etwas anders.
Peter Mikropit

Aljoscha · Dezember 03, 2023, 20:16:27 NACHMITTAGS

Hallo Peter,

gerade die blauen LEDs sind alles andere als schmalbandig. Die strahlen jede Menge Licht anderer Farbe ab. Ein passender Anregungsfilter verbessert die Ergebnisse erheblich.

Viele Grüße

Alexander

3nzo · Dezember 03, 2023, 23:57:04 NACHMITTAGS

Hallo zusammen,
Ich bestätige, was Alexander gesagt hat, ich dachte auch, dass die blaue LED ausreicht, aber stattdessen ist der Anregungsfilter notwendig.
Mit dem gleichen Orange-Barriere-Filter ist das erste Foto ohne blauen Anregungsfilter und das zweite mit dem Filter. Die blaue LED leuchtet auch grün.
Beste grüße.

Enzo

TPL · Dezember 04, 2023, 01:47:57 VORMITTAG

"Fragen zu einfacher Floureszenz mit Auflichtilluminator"

Mit einer geeigneten Lichtquelle, einschließlich konventioneller LED, werden zumindest Anregungsfilter weniger wichtig. Ich habe gute Erfahrungen mit einer Art Minimal-Ausstattung aus dem Zeiss-STANDARD-Auflichtprogramm gemacht: Autofluoreszenz von fossilem organischen Material. Spezifische Anregungsfilter wären da eher hinderlich, da die Bandbreite wesentlich größer ist als die Grenzen der Filter-Wellenlängen es vorgeben.

peter-h · Dezember 04, 2023, 10:53:03 VORMITTAG

Liebe Fluoreszenzler,

ein LED-Märchen hält sich ganz hartnäckig

Bunte LEDs seinen monochrom

Wer die fast immer schwache Fluoreszenz von Stoffen kontrastreich sehen möchte muß alle Faktoren berücksichtigen.
Eine Kette ist nur so stark .....
Warum viele Worte? Der Vergleich sollte genügen.

Guten Wochenstart
Peter

mikropit · Dezember 04, 2023, 12:57:22 NACHMITTAGS

Ich verwende grundsätzlich keine UV LEDs, weil ich Bedenken habe, dass meine Augen doch was von den UV Strahlen abbekommen. Mit einer blauen LED bringen mir davor zusätzliche Blaufilter gar nichts. Es wird nur dunkler. Jedoch benötige ich zwingend ein oranges Sperrfilter. Dann gibt es ein recht gutes, helles Fluoreszenz Bild. Realisiert an einem Olympus BH2 und an einem Zeiss Phomi. Verstehen tue ich das trotzdem nicht ganz.
Peter Mikropit

Siegfried · Dezember 04, 2023, 13:18:09 NACHMITTAGS

Hallo Thomas, Peter H und Peter M. und Enzo
Danke für euere Hinweise.
Frage an Peter Mikropit:
Hat dein oranger Sperrfilter eine genaue Bezeichnung?
Gruß von Siegfried

3nzo · Dezember 04, 2023, 14:32:52 NACHMITTAGS

Hallo Siegfried,
Ich antworte auch. Mein orangefarbener Sperrfilter ist OG4, den Zeiss Jena später in G247 umbenannte. Dieser Filter ist im Revolver Barrier Filter mit einem GG9, umbenannt in G245, UV Barrier Filter, gekoppelt. Ich denke, das nützt dir nichts. Es war bei einem Fluoval 1 für Durchlicht nur mit einer einzigen Quelle, bestehend aus einer UV-Lampe, vorhanden. Wir wollten verhindern, dass UV-Strahlung über den blauen Anregungsfilter und den orangefarbenen Barrierefilter gelangt.
Das Argument, dass die blaue LED keinen Sperrfilter benötige, bezieht sich, wenn ich das richtig verstehe, auf Erfahrungen mit Auflichtbeleuchtung, die ich nicht erlebt habe. In meinem Fall erhalte ich, wie Sie auf meinem vorletzten Foto sehen können, ein Bild, das durch das Grün der blauen LED verschleiert wird.
Beste grüße.

Enzo