Elaeodendron xylocarpum

[Eckhard]

Hallo,

Elaeodendron xylocarpum ist ein Laubbaum, der in der gesamten Karibik vertreten ist. Im Gewächshaus des botanischen Gartens habe ich am Boden 2 Blätter aufgesammelt und geschnitten. Leider war der Blattstiel sehr kurz, so dass ich einen Teil des Blattes mit eingebettet habe, damit der Blattstiel fest sitzt. Die Schnitte zeigen deswegen nicht nur den Blattstiel sondern auch ein bisschen vom Rest des Blattes.

Dummerweise haben sich die Schnitte nach dem Schneiden verformt. Die Schnitte sahen aus wie ein perfektes U und es ist mir nicht gelungen, einen Schnitt vernünftig einzudecken. Das Problem der Verformung wurde hier schon einmal diskutiert:

https://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=3905.0

Da ich über Weihnachten etwas Zeit hatte, habe ich ein bisschen experimentiert und einiges an Elaeodendron Laub verbraucht.

Ich freue mich, dass ich eine Methode gefunden habe, die Verformung rückgängig zu machen. Dazu wurde wie folgt vorgegangen:

Schneiden mit Möhreneinbettung
15 min Fixieren in AFE (Schnitte sind verformt)
5 min Ethanol 70%
3 min Ethanol 50%
5 min Ethanol 30%, dabei auf der Wärmeplatte auf 60°-70° C erwärmen, Aqua dest. Flasche ebenfalls erwärmen
5 min Aqua dest., mit Temperatur 60°-70°, 3x wechseln, ggf. etwas länger bis die Schnitte wieder fast plan sind

Danach wurden die Schnitte mit der Wackerfärbung gefärbt.


2.5x EC Plan Neofluar, Pol, Zeiss 1.6x T2 Adapter, Nikon D5000, ISO 200, 0.8 Sek


5x EC Plan Neofluar, Zeiss 1.6x T2 Adapter, Nikon D5000, ISO 200, 1/500 Sek


10x EC Plan Neofluar, Zeiss 1.6x T2 Adapter, Nikon D5000, ISO 200, 1/400 Sek


20x EC Plan Neofluar, Zeiss 1.6x T2 Adapter, Nikon D5000, ISO 200, 1/500 Sek

Alles Einzelschüsse, keine Stacks. Beim zweiten Bild habe ich die Schärfeebene nicht richtig getroffen, Xylem und Co. sind nicht ganz scharf.

Es wäre schön, wenn andere Opfer der verformten Schnitte die Wärmebehandlung ausprobieren könnten, um das Verfahren zu bestätigen. Bisher habe ich es nur bei Elaeodendron xylocarpum probiert.


Herzliche Grüsse
Eckhard

[Jan Kros]

Hallo Eckhard,

Schöne Bilder und schön gefäbte Schnitten

Jan Kros

[RainerTeubner]

Hallo Eckhard,

die Schnitte, die ich von einem Mistelzweig angefertigt habe, haben sich beim Entwässern mit Isopropanol nach den Färbungen mit Etzold blau und mit Etzold grün sattelförmig verformt, und zwar umso mehr, je trockener der Schnitt wurde. So richtig eben wurden die Schnitte auch nach dem Einbetten in Euparal und dem Beschweren mit Schrauben und Muttern nicht. Detlef hat mir dann zur Fixierung in AGE (Alkohol-Glycerin-Eisessig) anstelle AFE (Alkohol-Formalin-Eisessig) geraten, da wurden die Schnitte beim Entwässern mit Isopropanol wesentlich weniger verformt und ließen sich auch leichter eben pressen. Vielleicht muß man den Glycerin-Anteil der Mischung an das Material anpassen.

Viele Erfolg!

Rainer

[Eckhard]

Hallo Rainer,

mit Glyzerin habe ich auch etwas gespielt. Aber das Ergebnis mit dem 60° warmen Wasser war sehr viel besser. Mal sehen, ob ich morgen etwas Mistel auftreiben kann. Dann mache ich Fotos auf denen man die Verformung sehen kann.

Hallo Jan,

schön, dass Dir der Schnitt gefällt.

Herzlicher Gruss
Eckhard

 

[Detlef Kramer]

Lieber Eckhard,

nicht das Glycerin ist der entscheidende Faktor, sondern der Essig. Der macht das Gewebe weich, während Ethanol härtet. Und Formol kann man getrost ganz weg lassen, wenn es nur auf die Anatomie und nicht auf den Zellinhalt ankommt. Glycerol/Glycerin verbessert die Schneidfähigkeit. Man kann auch die Schnitte vor dem Färben in Essig legen, dann aber vor dem Färben gut wässern.

Herzliche Grüße und beste Wünsche zum Neuen Jahr vom kleinen Reinheim im Odenwald ins große Berlin,

Detlef

[Eckhard]

Hallo,

um mal zur Mikroskopie zurückzukehren, habe hier ich noch einen Blattstiel von meinem Elaeodendron Laub.

Man nehme ein Zylindermikrotom, eine Möhre, Detlefs Einmalklingenhalter und Farben von Klaus Herrmann.  Färbung Wacker W3A nach dem Rezept von Rolf-Dieter Müller. Das Ergebnis, eine Orgie in Rot


20x, kein Stack, unbearbeitet

Herzliche Grüsse
Eckhard