Empfehlung fuer blaue LED fuer Auflichtfluoreszenz?

[JB]

Hallo Forum,

Ich moechte eine blaue LED fuer die Auflichtfluoreszenz einsetzen (FITC; Chlorophyll). Kann jemand eine LED empfehlen, insbesondere im Hinblick auf eine gute Objektausleuchtung (Einzelchip-LED?) bei Verwendung im Zeiss Epi-Fluoreszenzkondensor IV?

Beste Gruesse,

Jon

[Hugo Halfmann]

Hallo Jon,

ja, diese hier:

http://www.led-tech.de/de/High-Power-LEDs-Cree/CREE-XP-Serie/CREE-XP-E2-Royal-Blau-auf-Star-Platine-LT-2202_120_138.html

Was besseres gibt´s derzeit wohl nicht lt. Herrn Aarns.

Ich werde diese LED auch bestellen, meine ist am Wochenende verraucht  .

[wilfried48]

Hallo Jon,

das kommt darauf an was für einen Filtersatz du in deinem Fluoreszenzkondensor IV hast.  Der Farbstoff FITC hat auf jeden Fall sein Anregungsmaximum bei 495 nm.

Und wenn auf dem Filtersatz FITC steht denke ich, dass er diesem Anregungsmaximum angepasst ist. Eine blaue LED mit 470 nm würde dann näher liegen als die von Hugo vorgeschlagene

königsblaue mit 455 nm.  Und eine kräftige kaltweisse (keine neutralweisse oder gar warmweisse) also eine blaustichige würde eventuell sogar noch besser passen.

Aber am besten ist du schaust im Zeiss Filterassistent nach wo das Maximum bzw. der Bereich deines Erregerfilters liegt : https://www.micro-shop.zeiss.com/?s=6042221519c914&l=de&p=de&f=f

viele Grüsse
Wilfried  

[JB]

Hallo,

Danke fuer die Hinweise!

ja, diese hier http://www.led-tech.de/de/High-Power-LEDs-Cree/CREE-XP-Serie/CREE-XP-E2-Royal-Blau-auf-Star-Platine-LT-2202_120_138.html

Die sieht gut aus. Die Chip-Flaeche wirkt allerdings recht klein; wird damit die Hinterlinse der Objektive noch gut ausgeleuchtet? Ich habe ein Objektiv 25/0.75 Oel.

Meine ist am Wochenende verraucht 

Da sieht dann wieder nicht so gut aus


@Wilfried

Ich habe den Filtersatz XP53 von Omega Filters: http://www.omegafilters.com/Products/Curvomatic

Der Filtersatz ist fuer die gleichzeitige Beobachtung von FITC und Texas Red. Der Erregerfilter hat fuer die Blauanregung einen Cut-off bei ca. 475 nm.

Moeglicherweise werde ich aber den Erregerfilter durch einen neuen Filter um die 480 nm ersetzen.

Mit freundlichen Gruessen,

Jon

[Hugo Halfmann]

Hallo Jon,

Die sieht gut aus. Die Chip-Flaeche wirkt allerdings recht klein; wird damit die Hinterlinse der Objektive noch gut ausgeleuchtet? Ich habe ein Objektiv 25/0.75 Oel.

Ich habe zwar dieses Objektiv nicht, aber bei mir funktioniert(e) es mit allen Plan Objektiven. Ich habe jedoch die Lampe immer ein wenig nach hinten aus der Leuchte 60 herausgezogen, um eine gleichmäßige Ausleuchtung zu haben. Kann aber auch an meiner primitiven Bastel-LED Adaption liegen.

Zitat von: Hugo Halfmann am Heute um 11:20:50
Meine ist am Wochenende verraucht

Da sieht dann wieder nicht so gut aus Smiley

Nee ! Aber eine neue LED ist billiger wie eine HBO...

Die Cree strahlt lt. Datenblatt bei 450-460nm, m.E. sollte für FITC genug benachbarte Strahlung vorhanden sein. Ich hatte letzte Woche mit Herrn Aarns telefoniert, lt. seiner Auskunft strahlen die königsblauen vom UV Bereich bis in den grünen. Ohne Anregungfilter geht auch bei mir nichts, das Bild ist dann Murks. Die angegebene Wellenlänge ist zwar vorherrschend, aber nicht ausschließlich. Und das variiert dann auch noch von LED zu LED

[Rene]

Der Filtersatz ist fuer die gleichzeitige Beobachtung von FITC und Texas Red. Der Erregerfilter hat fuer die Blauanregung einen Cut-off bei ca. 475 nm.

Mit freundlichen Gruessen,

Jon

Really? 475 is kinda early for FITC. Do you have a part number for the set?

If it is mend for both FITC as for Texas Red I expect it to give interesting results with different algal groups. Cyano's will not fluoresce when using a Royal Blue led, but  at least partly will show up nicely orangy with a white LED exciter! Where does it cut-off in the red, proper red autofluorescence is near 700, might be out of reach for a Texas Red set.

Best wishes, René

[JB]

Hi René,

Thanks for your message. If you use the tool on the Omega website, you can use the scroll-down menu and select filter set "XP53" http://www.omegafilters.com/Products/Curvomatic

It's designed for FITC+Texas Red. I didn't buy it specifically for Chlorophyll observation but it came with my pre-owned Zeiss epi-fluorescence condenser. It's old and pretty degraded but I'll give it a shot. Most likely I will replace at least the emission filter later.

The cut-off for the red emission is at 666 nm already, which is not great for observing chlorophyll autofluorescence!

Kind regards,

Jon

[Rene]

Hi Jon, I have checked my data. Due to the double excitation bands of your cube, you can excite every phototroph organism. Your barrier filter cuts off  kinda early, which limits your fluorescence yield considerably for chlorophyll a (which peaks at the point where your barrier filter stops).  Blue-green algae contain very typical antenna pigments that have their emission at around 640 (phycocyanine, all cyano's). However, the typically bright orange emission of phycoerythrin at arond 570nm (not all blue-greens have this pigment) falls within the second exciter band, so will not be seen.

Concluding: your set shows pretty much all chlorophyll autofluorescence. By exciting with a white LED instead of a Royal Blue led might get you extra fluorescence yield due to excitation of carotenoids (chryso/dino/raphidophytes). The fluorescence yield of chlorophyll is of a deep red, only fully appreciated with a camera as your eye is not very sensitive to it (nor are most consumer cams with IR filter, by the way). Anyway, all cyanobacteria (including red algae, cryptophytes and such with endosymbiontic cyano's) will show brighter, with a more orangy tint to it.

Looking forward to your results, with best wishes,

René.

[ECJEN]

Hallo Allen,
Wenn ich eine Bemerkung machen darf zum cree LED. Wie der Lieferant dieser cree LED sagt. Besser kein Wiederstand benutzen. Ein Konstantstrohmquelle is besser und gibt kein wärme Problemen welchen wieder Helligkeit Schwankungen verursachen. Eine billig Lösung vielleicht diese zwei (3Watt 420nm)


http://www.dx.com/p/jrled-3w-uv-3w-7lm-420nm-3535-smd-led-purple-light-bead-emitter-silver-white-3-2-3-7v-313148#.U3HBPyiZab4

http://www.dx.com/p/2-7v-6v-3w-cree-circuit-board-for-flashlights-15mm-2-7mm-25518#.U3HB6yiZab4