Diatomeen - Detail, Diskussion Auflösung, Einbettung, IOR

[peter-h]

Liebe Auflöser/innen,

per Zufall habe ich ein Präparat der Surirella gemma, sowohl in Luft wie auch in Balsam (was immer das ist).


So gut es geht habe ich die beiden Präparate mit identischen Einstellungen aufgenommen. Unterschiede im Kontrast ? Allerdings gibt es leichte Farbsäume im Luftpräparat.

Und hier eine "richtige" Aufnahme.


Leitz Apo 90/1,4 Öl , Kondens. NA 1,4 immergiert , UV-LED @365nm , monochrome Kamera DMK72 , 40 Einzelbilder mit HeliconFocus verrechnet. Nachbearbeitet.
Die UV-Transparenz des Oly SPlan Apo 100/1,4 Öl ist leider nicht besonders gut, daher ist für UV das alte Leitz Apo mein Lieblingsobjektiv.

Viel Spass
Peter

P.S.
es gibt im MK 2009 Heft 2 einen alten Artikel zu Brechwerten von Diatomeen.
http://www.mikroskopie-ph.de/Mikrokosmos,%20Band%2098%282%29,%20S.%2098%20%282009%29%20Brechwertmessungen%20an%20Diatomeen.pdf

[anne]

Hallo Foristen,

ich habe den Luftversuch gemacht.
Apertur Kondensor und Objektiv auf 1,0 runter, aber immergieren mit normalen Immersionsöl musste ich schon.
Ich bekomme dann nicht mal mehr eine Nitzschia spec. sauber aufgelöst. Das ist zumindest für mich nicht die Lösung.

Die Suriella gemma hatte ich mal, als ich mein Mikroskop ganz neu hatte, getestet. Damals noch mit der Nikon D3X, die immer etwas Unschärfe ins Bild gebracht hat. Aufgenommen im DIC mit dem 100er DPlanapo, ohne geölten Kondensor, ohne sonstige Veränderungen.
Diese muss aber wirklich optimal am Deckglas gehaftet haben ohne Harz dazwischen.
Michael: in dem Test Präparat ist diese Diatomee drin.

Hier mein Bild: ziemlich runterskaliert



lg
anne

[Carlos]

Hallo,
Hätte ich mal meine Worte zurück! Mir schien das Bild auf mangelnden Unterschied in den Brechungsindizes Diatomee / Einschlussmittel hinzudeuten. Da lag ich offensichtlich total falsch. An ein zu niedriges Auflösungsvermögen (1,4-er Objektiv geölt, Kondensor nicht geölt) habe ich nicht gedacht.
Tut mir leid.
Gruß Carlos

[anne]

Hallo Carlos,

nein, nein, das war schon gut so!
ich habe es gerne geprüft, auch schon für Schmetterlingsschuppen habe ich diesen Vergleich gemacht.
Und probieren geht eben über studieren...
lg
anne

[Tausendblatt]

Hallo Anne,

vielen Dank, das wollte ich sehen. Ich hätte erwartet, die Porenreihen als Linien zu sehen...
Möglicherweise sind viele DIK-Systeme dafür zu sehr auf maximalen Kontrast optimiert, auf Kosten der Auflösung. Im alten Zeiss-DIK gab es da ein Prisma I, das Prismen mit geringerer Aufspaltung hatte, wenn ich mich richtig erinnere.

Danke übrigens für das Lob. :-))

Beste Grüße
Jens

Hallo Jens,

hier ein schnelles Bild im DIC mit 100er 1,4 Objektiv.
Ich kann bei dieser Diatomee nicht mal die Linien auflösen im DIC.
Also Hut ab vor Deinen tollen Bildern.



lg
anne

[Holger Adelmann]

Liebe Kollegen,

Amphipleura pellucida

mit Leitz DIC nach Smith PL 100/1.32




mit Leitz Pl Apo 63/1.40 und ringförmigem Hellfeld mittels Immersions Dunkelfeldkondensor Ap. 1.40



Wegen der Größe des Objektes relativ zu dem Bildausschnitt sind die Bilder natürlich aus mehreren Kacheln zusammengesetzt.

Viele Grüsse,
Holger

[Holger Adelmann]

Ach ja - die Bilder lassen sich noch anklicken und so vergrössern.....

[Tausendblatt]

Hallo Holger,

sehr gut gelungen, danke, es geht also noch mehr mit DIK. :-)

Jetzt fehlt nur noch die lebende Amphipleura - bin dran...

Schönes Wochenende noch
Jens

Ach ja - die Bilder lassen sich noch anklicken und so vergrössern.....

[Eckhard F. H.]

...Dunkelfeldkondensor Ap. 1.40

Hallo Holger,
was ist das für ein Dunkelfeldkondensor A.40 und welche Bezeichnung trägt er?
Gruß vom Bodensee
EFH

[Holger Adelmann]

Sorry Eckhard, ich meinte natürlich den DF Kondensor 1.20 ...
z.B. hier:
http://www.rafcamera.com/en/microscopes/condensers/ernst-leitz-wetzlar-dark-field-condenser-n-a-1-2
Holger

[anne]

Hallo Holger,
das ist natürlich der Hammer!

Wie lang war denn Dein Exemplar?

lg
anne

[Holger Adelmann]

Hallo Anne,

dieses Exemplar war über 100 µm lang.
Die hervorragende Auflösung liegt nicht nur in der Optik begründet - es müssen alle Rahmenbedingungen stimmen:
- richtige Brechzahl des Harzes
- Dicke der Harzschicht
- Lage der Diatomee zum Deckglas (Streupräparat ab Besten auf dem Deckglas machen, nicht auf dem Objektträger ...

Man sieht also dass man schon mit dem preiswerten Immersions-DF-Kondensor sehr gute Auflösung bei Diatomeen erreichen kann und den sehr teuren DIC hier nicht unbedingt braucht,
allerdings ist ein hochaperturiges, sehr gut korrigiertes Objektiv immer nötig.
Ich habe hier das superbe Leitz Pl Apo 63/1.40 verwendet, Peter Höbel hat aber mit dem nicht plankorrigierten, alten Leitz Apo 90 ebenfalls hervorragende Ergebnisse erzielt.

Ich hatte nach dem ermutigenden Beginn weiter experimentiert und das beste lichtmikroskopische Ergebnis bei der Kombination von AVEC-DIC mit violettem Licht (405 nm, Hg-Bogenlampe mit Interferenzfilter) erzielt:




Das erfordert natürlich einigen Aufwand - auch an Hardware.

Herzliche Grüsse,
Holger

[anne]

Hallo Holger,
vielen Dank für die Erläuterungen.
Meine Exemplare sind alle kleiner bzw. kürzer, max. 75 µm lang.
Eingedeckt wurde in ZRAX, in was sind Deine eingedeckt?
Streupräparat natürlich auf dem Deckglas, die einzige Unbekannte ist die Harzschicht die evtl. noch zwischen Diatomee und Deckglas liegen könnte, aber relativ unwahrscheinlich, da wie schon gesagt, die Diatomee auf dem Deckglas liegt.
Und mein Exemplar ist aus England.
Vielleicht liegts daran .
Auf jeden Fall klasse Bilder.

lg
anne

[Tausendblatt]

Hallo Holger,

wow, das ist richtig gut! Habe leider keine gute Lichtquelle für Violett.

Ich war gerade an der Bad Nenndorfer Kraterquelle (wo auch Peter Höbel die Proben her hat) für eine frische Amphipleura-Probe...

Beste Grüße
Jens

...
Ich hatte nach dem ermutigenden Beginn weiter experimentiert und das beste lichtmikroskopische Ergebnis bei der Kombination von AVEC-DIC mit violettem Licht (405 nm, Hg-Bogenlampe mit Interferenzfilter) erzielt:




Das erfordert natürlich einigen Aufwand - auch an Hardware.

Herzliche Grüsse,
Holger

[Eckhard F. H.]

Sorry Eckhard, ich meinte natürlich den DF Kondensor 1.20 ...

Danke, Holger. Schade... 
Gruß - EFH