Calcofluor White Niederschlag in Lösung

Rene · Dezember 20, 2020, 00:12:48 VORMITTAG

Blue-green with a FITC cube also works well. Depends a bit on the autofluorescence of your subject.

René

mlippert · Dezember 20, 2020, 02:24:09 VORMITTAG

Ja, 365 geht! Anbei das erste Bild. Zwei Tropfen verdünnter Natronlauge haben den Niederschlag entfernt. Die Autofluoreszenz der Lösung wird extrem schnell gebleicht, die Färbung aber nicht.

mlippert · Dezember 20, 2020, 02:32:19 VORMITTAG

Das Hobbythek Prohell funktioniert ebenfalls. Es hat aber mehr Autofluoreszenz die auch zusammen mit der Färbung wegbleicht. CFW ist brillanter. Wenn man die Möglichkeit hat es zu spülen, dürfte es keinen Unterschied geben.

Carsten Wieczorrek · Dezember 20, 2020, 09:00:02 VORMITTAG

Moin,
was für Partikel hast du denn da gefärbt?
Carsten

jochen53 · Dezember 20, 2020, 10:53:54 VORMITTAG

Hallo,

einen ähnlichen wasserlöslichen Fluorescence Brightener 357 (CAS 41098-56-0) vertreibt u.a. https://www.moersch-photochemie.de; 50 g für 20.11 € und Axelcolor in Italien; axel@color.com 100 g für 17,50 € über einen ebay-shop.
Auch Tinopal LPW der BASF scheint ähnlich zu sein, Kleinmengen vertreibt BTC.europe.com
Vielleicht schicken die Muster an Firmen oder Hochschulen.

Viele Grüße, Jochen

Haus@Hund · Dezember 20, 2020, 17:19:51 NACHMITTAGS

Hallo zusammen,

Hund verkauft das Färbemittel in etwas anderer Rezeptur, gebrauchsfertig in 10 ml-Tropffläschchen. Wir bieten es insbesondere Dermatologen in Kombination mit unseren "Myko"-Geräten an. Ich habe mal eine Übersichtspräsentation über unsere Mikroskope erstellt, sie enthält auch Bildbeispiele: https://www.hund.de/images/pdf/Mikroskopprogramm_Hund_09_20.pdf.

Adventliche Grüße
Jörg

mlippert · Dezember 20, 2020, 20:40:52 NACHMITTAGS

Oh, eine wirklich gelungene Präsentation! Ist das Mykoval mit Evans Blue? Bringt das was für die Diagnostik? Was genau färbt man denn mit FITC - ich kenne das nur als Marker für Sonden - und Thiazinrot? Haben Sie dafür Färbeprotokolle?

Rene · Dezember 21, 2020, 08:53:57 VORMITTAG

Zitat von: mlippert in Dezember 20, 2020, 20:40:52 NACHMITTAGS
Was genau färbt man denn mit FITC - ich kenne das nur als Marker für Sonden - und Thiazinrot? Haben Sie dafür Färbeprotokolle?

No I mean CWhite also fluoresces with blue-Anregung with an FITC Filterblock.

Best wishes, René

Haus@Hund · Dezember 21, 2020, 09:34:37 VORMITTAG

Zitat von: mlippert in Dezember 20, 2020, 20:40:52 NACHMITTAGS
Oh, eine wirklich gelungene Präsentation! Ist das Mykoval mit Evans Blue? Bringt das was für die Diagnostik? Was genau färbt man denn mit FITC - ich kenne das nur als Marker für Sonden - und Thiazinrot? Haben Sie dafür Färbeprotokolle?

Guten Morgen,

Uvitex, Fungiqual und Mykoval sind von der eigentlichen Färbung her identisch, Mykoval ist allerdings ein speziell für Hund entwickeltes Färbemittel und enthält noch spezielle Penetrationsvermittler. Evans Blue ist also nicht enthalten. Das Hauptargument in der Diagnostik besteht darin, dass man keine Pilzkulturen anlegen muss, sondern schon im Nativpräparat Pilzelemente erkennen kann. Seite 53 der Präsentation zeigt zwei Beispiele: Links eine angefärbte Hautschuppe, rechts ein Ausschnitt aus einer Innenraumprobe (Tesafilm-Präparat). Das rechte Bild nehme ich immer wieder, weil es so aussieht, als ob sich zwei Knochenhände einen Ball zuspielen

.

Man kann Mykoval (und auch die anderen Farbstoffe) aufgrund ihrer breiten Absorptionsspektren auch im Blauen anregen und die Grünfluoreszenz detektieren. Das wurde vor meiner Zeit von Hund im mittlerweile schon fast antiken "Fungiscope" umgesetzt. Da damals noch keine leistungsstarken LEDs verfügbar waren, war das Gerät um eine starke Halogen-Lichtquelle herum gebaut, die eben nur im Blauen ausreichend Intensität abgibt.

FITC wird in der Immunfluoreszenz eingesetzt. Der Schlüssel dazu sind Antikörper, die einerseits an die Zielobjekte ankoppeln, andererseits ein Farbstoffmolekül tragen. Als Farbstoff kommen etwa das erwähnte FITC (Blauanregung, Grünfluoreszenz) infrage, oder aber auch z. B. TRITC (Grünanregung, Rotfluoreszenz). Während aber Mykoval leicht anzuwenden ist, benötigt man für eine FITC-Färbung bereits eine spezielle Laborausstattung. Wir haben das einmal im Rahmen eines Projekts mit einem externen Labor anschauen können, sind aber dazu selbst nicht in der Lage - und haben daher leider auch keine Färbeprotokolle.

Vorweihnachtliche Grüße
Jörg

jochen53 · Dezember 21, 2020, 11:12:56 VORMITTAG

Hallo,

als Alternative zu Calcofluor White wird u.a. UVITEX 2 B verwendet, das auch unter anderen Bezeichnungen verwendet wird, man findet dazu mehrere Publikationen in "labmed". Es wurde sogar bei ebay schon angeboten, 2,5 g für 10 €.

Chemical Name   Fluorescent Brightener 24 (Technical Grade)
Synonyms
   4,4'-Bis[4-(3-sulfoanilino)-6-[bis(2-hydroxyethyl)amino]-1,3,5-triazin-2-yl]aminostilbene-2,2'-disulfonic acid tetrasodium salt; Heliofor PKayaphor BSN; Kayaphor SN; Mikephor BN; Mycoval; Ranipal 2B; Tinopal 2B; Tinopal 2BF; Uvitex 2B; Whitex BB; Whitex BB conc.
CAS Number   12224-02-1
Alternate CAS #   5131-70-4
Molecular Formula   C₄₀H₄₀N₁₂Na₄O₁₆S₄
Molecular Weight   1165.04
Category   Research Tools; Fluorescent Reagents; Materials;
Applications   It is a fluorescent whitening agent, used in textile and paper industry.
References
   Jafari, R., et al.: Textile Research Journal, Vol. 77, Iss.10, P: 456-763 (2007);

Jochen

Ralf Feller · Dezember 21, 2020, 19:57:58 NACHMITTAGS

Hallo,

z.B. hier

https://www.ebay.de/itm/254813191536

ich habe es mal gekauft, färbte aber schlechter als Mycoval.
Ich habe aber nicht lange daran "geforscht" weil ich damals keine Anwendung hatte.

Als Testobjekt eignet sich ein Mundschleimhautabstrich mit Backhefe vermengt,
ausstreichen, lufttrocknen, 2Min alkoholfixieren, färben, waschen (kurz), trocknen, eindecken.

vielleicht hat ja jemand mal Zeit die opt. Aufheller auszuprobieren.

LG Ralf

Carsten Wieczorrek · Dezember 21, 2020, 21:18:43 NACHMITTAGS

Hallo Ralf,

OK, das mache ich mal. Ich mache aber einen neuen Faden dafür auf, damit es jeder mitbekommt.

Carsten

mlippert · Dezember 23, 2020, 01:16:24 VORMITTAG

Zitat von: Haus@Hund in Dezember 21, 2020, 09:34:37 VORMITTAG
Zitat von: mlippert in Dezember 20, 2020, 20:40:52 NACHMITTAGS
Oh, eine wirklich gelungene Präsentation! Ist das Mykoval mit Evans Blue? Bringt das was für die Diagnostik? Was genau färbt man denn mit FITC - ich kenne das nur als Marker für Sonden - und Thiazinrot? Haben Sie dafür Färbeprotokolle?

FITC wird in der Immunfluoreszenz eingesetzt...

Danke für die ausführliche Beschreibung! Mir ist aufgefallen, dass CFW bei Awesenheit von KOH Pilze eher grünlich färbt als Blau. Hefe in Wasser leuchtet wunderschön blau, in den Hautpräparaten hingegen ist eine sehr starke Hintergrundfluoreszenz der Zellen bei Färbung mit CFW zu sehen, die ebenfalls rein blau ist. Pilzstrukturen leuchten dagegen apfelgrün. Leider fehlen mir momentan etwas die Positivkontrollen, da es immer nur Spuren irgendwelcher Pilze sind bzw. halt Saccharomyces.
Bezüglich FITC - zumindest für Fluorescein selbst gibt es eine Fluoro-Gramfärbung:
https://patents.google.com/patent/EP1029074B1/en