Fluoreszenzaufnahme von einem Hüpferling

[Daniel Scheibenstock]

Hallo Zusammen,

Anbei eine Aufnahme bei der es mir gelungen ist den Mageninhalt eines Ruderfusskrebses (stimmt das?) abzubilden. Das ganze als Collage damit man die Aufnahme in relation zum Tier setzen kann.

Liebe Grüße Daniel

[Daniel Scheibenstock]

Als Datei

[Spectrum]

Hallo Daniel,

Hallo Zusammen,

Anbei eine Aufnahme bei der es mir gelungen ist den Mageninhalt eines Ruderfusskrebses (stimmt das?)

Ja, dein Exemplar gehört zur Unterklasse der Copepoda (Ruderfusskrebse).
Schön das sich noch mehr mit dem Thema Fluoreszenz beschäftigen.
Welchen Filtersatz, Beleuchtungsart und welche Kamera hast du für die Aufnahme genutzt?
Wurde das am Universal aufgenommen?
Ich gehe mal davon aus, das hier Autofluoreszenz von gefressen Algen zu sehen ist. Mit zwei verschiedenen Filterkombinationen, richtig?

Grüße Holger

[Daniel Scheibenstock]

Hallo Holger,

Die Fragen beantworte ich dir gerne:

Zeiss IM35
Mit einer Sony Alpha IV
Licht macht eine Xenon Eigenbau Lampe
Filtersatz war: 450-490/ FT510 / LP520

Ja es handelt sich um auto Fluoreszenz. Das Signal war relativ Schwach daher habe ich noch etwas in Lightroom nachbearbeitet

[Spectrum]

Ah, okay.
Dann ist das letzte Bild mit dem schwarzen Hintergrund also aus dem ersten per Bildbearbeitung entstanden?
Hast du auch eine Möglichkeit LED's einzusetzen?
Wäre sicherlich von großem Nutzen:
-Kein UV-Anteil wie bei Xenon
-Bessere Bildergebnisse bei der genannten Filterkombination
-Wird nicht heiß
Grüße Holger

[Spectrum]

P.s.:
Ein Bild von deinem Beleuchtungsstrahlengang, gerne auch von deiner Xenon Beleuchtung, wäre hilfreich.

[Daniel Scheibenstock]

P.s.:
Ein Bild von deinem Beleuchtungsstrahlengang, gerne auch von deiner Xenon Beleuchtung, wäre hilfreich.

So habe ich es gelöst: Die Xenon-Lampe hat noch ihr UV-Schutzrohr (am IM35 nutze ich ohnehin nur einen Filtersatz).

Die Bilder sind alle vier unterschiedlich!

Für die LED werde ich demnächst eine eigene Lösung für das Universal basteln, um den Vergleich selbst durchführen zu können und herauszufinden, was mir besser gefällt. Beim Universal habe ich vier Kanäle für die EPI-Fluoreszenz, was die Sache ohnehin etwas komplexer macht.

[Spectrum]

Ok, verstehe.
Was ich bei deiner angegebenen Filterkombination nicht verstehe, ist das, vorausgesetzt es handelt sich hier wirklich um Chlorophyll, die Fluoreszenz rot sein müsste.
Ist aber grün
Oder wurde das Bild oben rechts auch bearbeitet?
Aber was man jetzt schon sagen kann ist das der cyanfarbene Hintergrund darauf beruhen dürfte, das dort kurzwelliges Anregungslicht durchkommt...
Und da hätte ich persönlich bei einer Lichtquelle wie Xenon schon ein mulmiges Gefühl. Ich würde da nur mit der Kamera arbeiten, und die Okulare aussen vor lassen.
Mach doch für den Anfang am besten Aufnahmen von einem Moosblättchen. Das ist besser vergleichbar.

[Jürgen Boschert]

Lieber Daniel,

ich kann da Holger nur beipflichten: Sei vorsichtig mit den Brennern! Hast Du denn ein Sperrfilter im Strahlengang?

[Spectrum]

Tip:
Falls du eine Brille mit photochromen Gläsern auftreiben kannst, halte sie mal dorthin wo sonst dein Objektträger ist...

[Aljoscha]

Was ich bei deiner angegebenen Filterkombination nicht verstehe, ist das, vorausgesetzt es handelt sich hier wirklich um Chlorophyll, die Fluoreszenz rot sein müsste.
Ist aber grün

Hallo Holger,

Das ist keine Autofluoreszenz von Chlorophyll. Ich nehme eher an, dass ein Fluophor wie etwa Acridinorange zu Einsatz kam, den das Tierchen mit der Nahrung aufnahm.

Aber was man jetzt schon sagen kann ist das der cyanfarbene Hintergrund darauf beruhen dürfte, das dort kurzwelliges Anregungslicht durchkommt...
Und da hätte ich persönlich bei einer Lichtquelle wie Xenon schon ein mulmiges Gefühl. Ich würde da nur mit der Kamera arbeiten, und die Okulare aussen vor lassen.

Dieses Leuchtmittel setzt kein UV frei, dazu müsste man das Schutzrohr entfernen. Der grüne Hintergrund hat eine andere Ursache, meiner Ansicht nach den im Wasser vorhandenen Farbstoff.

Viele Grüße

Alexander

[Daniel Scheibenstock]

Hallo Zusammen,

Es freut mich sehr das so eine rege Diskussion entstanden ist 

So der Reihe nach:

@alexander: es wurden keine Farbstoffe zugesetzt.

@Holger: die Rote Farbe wurde bei der Bearbeitung leider entfernt. Aber die Abbauprodukte von pflanzlichen Material können die grün/ gelbe Färbung erklären. Der blaue Hintergrund ist wahrscheinlich darauf zurückzuführen das ich vergessen habe das Licht des Zimmers auszuschalten 

Von was für einer Brille redest du da?

Die Bilder von klassischer autofluoresenz reiche ich nach

Liebe Grüße Daniel

[Daniel Scheibenstock]

Anbei die Bilder:
Eines unbearbeitet und eines von Algen

[Daniel Scheibenstock]

@Jürgen: ich gehe stark davon aus das da alles passt bei mir

[Aljoscha]

Hallo,

Das passt schon! Weder der Anregungsfilter noch der Emissionsfilter lassen UV durch, das Schutzrohr des Leuchtmittels auch nicht.

Wichtiger ist aus meiner Sicht ein Wärmeschutzfilter. Xenon-Lampen strahlen verdammt viel IR ab. Der Anregungsfilter lässt diese Strahlung ab 1000 nm ungehindert durch, der Emissionsfilter sowieso. Da wird es den Proben schnell zu warm.

Was das Raumlicht anbelangt: Ich lege beim Inversmikroskop einfach ein Stück schwarzen Bastelkarton auf die Petrischale. Schon ist der Hintergrund schwarz.

Viele Grüße

Alexander

Alexander