Autor Thema: HISTOLOGIE: PAS Färbung mit Hausgemachten Schiffs Reagenz  (Gelesen 20288 mal)

Ronald Schulte

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HISTOLOGIE: PAS Färbung mit Hausgemachten Schiffs Reagenz
« am: Juni 07, 2012, 13:18:56 Nachmittag »
Wenn das Reagenz von Schiff Rötlich ist geworden ist es nicht mehr brauchbar.
Klaus Herrmann hat mich die Stoffe geliefert und so wurde neues hergestellt und war ich neugierig ob mein selbst angefertigtes Reagenz mit Norit auch wirklich funktioniert.
Dafür habe ich mich ein Schnitt Jejunum (Dünndarm) ausgesucht und die PAS Färbung mal ausprobiert.

Der Dünndarm besteht aus viele Zotten und Krypten mit Schleimbecherzellen und Enterozyten.
Die Enterozyten sind verantwortlich für die Flussigkeitsresorption.
Die Schleimbecherzellen produzieren ein Mucus (Schleim) der Glykogenreich ist.
Glykogen ist ein verzweigtes Polysaccharid (Vielfachzucker), das aus Glucose-Einheiten aufgebaut ist.
Mit die PAS Färbung ist Glykogen leicht zu erkennen weil es tief Purper/Rosa anfärbt.




Protokoll PAS Färbung:

- Perjod Saure (1%) 25 min;
- Spulen AD;
- Schiff's Reagenz 25 min;
- Spulen AD;
- Spulen mit Leitungswasser 10 min (im Schnitt wird die Rosa Farbton jetzt deutlich sichtbar);
- Gegenfarben mit saures haematoxylin nach Ehrlich 2 min;
- Blauen in Leitungwasser 10 min;
- Spulen AD;
- Entwässern (Ethanol 70%, 85%, 95%, 2x Iso 100%, alle 4 min);
- Xylol (2x 4min);
- Eindecken (ich nehme gerne Depex).


Stitch von 8 Bilder, Objektiv Leitz plan Fluotar 10x
Download ein grosseres Bild (2mb):  Jejunum PAS gross





Objektiv Leitz plan Fluotar 16x





Das Rezept für 100ml Reagenz nach Schiff:
- Lösung A: 0,5Gramm Pararosalin lösen in 15ml Salzsäure 1N
- Lösung B: 0,5Gramm Kaliummetabisulfit lösen in 85ml AD

Lösung A und B gut vermischen und 24 Stunden im Dunklen stehen lassen. Die Rotbraune Farbe wird hier etwas Gelblich.

0,3 Gramm Norit abwiegen (eine Tablette Norit bis zu Pulver Pressen) und unter Rühren zufügen.
Die Schwarze Lösung Filtrieren. Es soll leicht Rosa sein. Nach einige Zeit (Stunden) verschwindet die Farbe und wird die Flüssigkeit Klar (Farblos). (Romeis 18 seite 243)
Die Farblösung in eine Braune Flasche im Kühlschrank aufbewahren.
Wenn die Lösung Rötlich geworden ist, ist sie nicht mehr brauchbar.

















Grüße Ronald
« Letzte Änderung: Juni 07, 2012, 13:44:57 Nachmittag von Ronald Schulte »
Mikroskope:
2x Leitz Orthoplan (DL, DF, Phako, POL, AL-Fluoreszenz, AL-DIC und Diskussionseinrichtung).
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Re: HISTOLOGIE: PAS Färbung mit Hausgemachten Schiffs Reagenz
« Antwort #1 am: Juni 07, 2012, 15:27:28 Nachmittag »
Nur als Ergänzung: Die PAS-Färbung wird auch genutzt, um die Basalemembran darzustellen. Das ist der "Teppich" auf dem die Epithelzellen sitzen. Man sieht sie oben als dünne rote Linie. Wichtig z.B. in der Diagnotik von Erkrankungen der Nierenglomeruli.

Auch Pilze lassen sich gut mit der PAS-Färbung darstellen.

Um zwischen Glycogen und anderen PAS-positiven Stoffen (Glycoproteine) zu unterscheiden wird die PAS-Färbung mit einer Diastase-Reaktion kombiniert. Glycogen wäre dann wieder negativ während Diastase-resistente Stoffe positiv bleiben.
MfG
Christian

moräne

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Re: HISTOLOGIE: PAS Färbung mit Hausgemachten Schiffs Reagenz
« Antwort #2 am: Juni 07, 2012, 17:50:44 Nachmittag »
Hallo Ronald
das die norit so weitverbreitet vorkommt, sogar in die medezinschränk hab ich jo gar nicht gewußt
virkelig erstaunenden Grüße
gerd

Ronald Schulte

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Re: HISTOLOGIE: PAS Färbung mit Hausgemachten Schiffs Reagenz
« Antwort #3 am: Juni 08, 2012, 10:25:09 Vormittag »
Christian,

Konntest du mal beschreiben wie so eine Diastase-Reaktion vorgeht?

Grüße Ronald
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Peter V.

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Re: HISTOLOGIE: PAS Färbung mit Hausgemachten Schiffs Reagenz
« Antwort #4 am: Juni 08, 2012, 10:35:02 Vormittag »
Hallo Ronald
das die norit so weitverbreitet vorkommt, sogar in die medezinschränk hab ich jo gar nicht gewußt
virkelig erstaunenden Grüße
gerd

Hallo Gerd,

ist das Dialekt?

Herzliche Grüße
Peter
« Letzte Änderung: Juni 08, 2012, 10:39:12 Vormittag von Peter V. »
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moräne

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Re: HISTOLOGIE: PAS Färbung mit Hausgemachten Schiffs Reagenz
« Antwort #5 am: Juni 08, 2012, 10:37:43 Vormittag »
hallo peter
Das ist code switching dutch dansk plus  minus Fehler
Farvel
Gerd
« Letzte Änderung: Juni 08, 2012, 20:18:29 Nachmittag von moräne »

Peter V.

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Re: HISTOLOGIE: PAS Färbung mit Hausgemachten Schiffs Reagenz
« Antwort #6 am: Juni 08, 2012, 10:42:05 Vormittag »
hallo ronald
Das ist die code switching
Farvel
Gerd



Ahhhhhhh........sooooo ist das!!!  ;D  ;D  ;D  ;D
Und ich Narr befürchtete schon, dass sich da jemand über die leichten sprachlichen Unzulänglichkeiten lustig macht. Aber das hätte ich mir auch nicht wirklich vorstellen können.

Virkelig beruhigte Grüße
Peter
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Ronald Schulte

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Re: HISTOLOGIE: PAS Färbung mit Hausgemachten Schiffs Reagenz
« Antwort #7 am: Juni 08, 2012, 12:51:34 Nachmittag »
Peter,

Ab und zu denke ich das ihr Geheimcodes schreibt um die Holländer zu 'tricksen'.
Vielleicht aber habt ihr schon ein wenig angst um unsere Mannschaft nächste Woche zu begegnen!

Grüße Ronald
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moräne

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Re: HISTOLOGIE: PAS Färbung mit Hausgemachten Schiffs Reagenz
« Antwort #8 am: Juni 08, 2012, 13:12:03 Nachmittag »
hallo Ronald
Wegen Fußball eine geheimcode?
Nej, never, njet
ICH HASSE FUSSBALL
ABSCHEU
Gerd
« Letzte Änderung: Juni 08, 2012, 13:31:07 Nachmittag von moräne »

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Re: HISTOLOGIE: PAS Färbung mit Hausgemachten Schiffs Reagenz
« Antwort #9 am: Juni 08, 2012, 20:03:09 Nachmittag »
Christian,

Konntest du mal beschreiben wie so eine Diastase-Reaktion vorgeht?

Grüße Ronald

Hallo Ronald, ich bestelle das bei Bedarf im Labor, daher kenne ich jetzt kein genaues Färbeprotokoll  :-\  . Aber ich habe hier was im Internet gefunden:

http://www.ihcworld.com/_protocols/special_stains/pas_diastase_ellis.htm
MfG
Christian

Florian Stellmacher

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Re: HISTOLOGIE: PAS Färbung mit Hausgemachten Schiffs Reagenz
« Antwort #10 am: Juni 09, 2012, 00:29:25 Vormittag »
Für Schritt 2 geht drauf spucken genauso gut! (kein Witz!)
Vorwiegende Arbeitsmikroskope:
Zeiss Axioskop 40 (DL, Pol, AL-Fluoreszenz)
Olympus BHS (DL, Pol, Multidiskussionseinrichtung)
Leitz Orthoplan (DL, DF, Pol, AL-Fluoreszenz)
Zeiss Phomi I - III (DL, DL-DIK, Phako, AL-Fluoreszenz)
Wild M400 Fotomakroskop (DL, DF, AL, Pol)

moräne

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Re: HISTOLOGIE: PAS Färbung mit Hausgemachten Schiffs Reagenz
« Antwort #11 am: Juni 09, 2012, 07:26:40 Vormittag »
Nochmals an Peter
Also ich liebe eigentlich Ronald `s Sprache, auch wenn er mit den Babymausen mir ein bißchen Horror eingejagt hat.

Ich glaube auch das Ronald schon weiß, daß sein gans auch Beine hat.
hoffentlich macht er jetzt nicht gleich ein gansenknie schnitt.
Grüße
gerd

Dieter Stoffels

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Re: HISTOLOGIE: PAS Färbung mit Hausgemachten Schiffs Reagenz
« Antwort #12 am: Juni 09, 2012, 09:23:28 Vormittag »
Hallo Ronald,

jetzt bleibt nur eins. Holland muss Deutschland im Fußball besiegen!

Herzliche Grüße!

Dieter

Ronald Schulte

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Re: HISTOLOGIE: PAS Färbung mit Hausgemachten Schiffs Reagenz
« Antwort #13 am: Juni 09, 2012, 13:02:59 Nachmittag »
@Christian,

Interessant. Danke für den Link. Wenn ich aber den Romeis 18 dazunehme ist auch da schon den Diastase-, Amylase-, Speicheltest beschrieben.


@Florian,

Zitat
Für Schritt 2 geht drauf spucken genauso gut! (kein Witz!)

Tatsachlich ist das kein Witz. Romeis 18 Seite 232 beschreibt es sogar wie eine Variation.
Ich werde es mal ausprobieren.



Grüße Ronald
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Ronald Schulte

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Re: HISTOLOGIE: PAS Färbung mit Hausgemachten Schiffs Reagenz
« Antwort #14 am: Juni 09, 2012, 13:09:52 Nachmittag »
@Dieter,

Zitat
Holland muss Deutschland im Fußball besiegen!

Ob das wohl passieren wird bezweifele ich doch ein wenig! Hier wurde schon zeit Wochen über nichts weiteres gesprochen aber das ist nur sprechen, jetzt muss es auch noch klappen. Macht mir alles wenig aus aber so denkt hier nicht jeder.
Jetzt weist du auch warum die meisten Holländer solche große Kopfe haben: sonst passt das großes Maul nicht drin!

Grüße Ronald 
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