Frage zu Legetechnik von Klaus Kemp

[Michael K.]

Hallo zusammen,


Gibt es Infos darüber, wie Klaus Kemp seine Diatomeepräparate gelegt hat? Hat er es auf ein Deckglas
gelegt oder auf dem Objektträger selbst? Einen Kreuztisch hat er glaube nicht benutzt.
Manchmal muss man den Träger (OT oder DG) drehen um Diatomeen verschieben zu können das geht ja mit einem normalem KT nicht.
Welches Objektiv hat der benutzt?  Ich finde ein 10er schon sehr gross, ich habe da meine Probleme
mit, wenn ich mal versucht habe mit der Legeborste Diatomeen heraus zu picken. Da habe ich schnell
übers Ziel hinaus geschossen.
Soviel man in dem bekannten Video sehen kann, hat er auch Glasnadeln benutzt. Ich werde aber
erstmal bei Wolframnadeln bleiben.  Glasnadeln werden mir zu dünn und werden dadurch zu flexibel.


Gruss
Michael

[bill2penn]

Hello Michael,

Klaus mounted on the slide almost all the time. He used a micromanipulator of his own design which simply moved in the Z-direction. He did all other movements of the slide with his fingers. I, and a number of other people use Klaus' method. He used an ancient Beck 15X objective with a huge working distance, and he also used an Olympus SPlan 40X designed for no cover slip. I extracted a part of a video showing how he does this. It has not sound.

https://drive.google.com/file/d/1Q4EhJf9LpwfjM8FBcE5TiWuuYrupldo7/view?usp=drive_link

Best regards,
Bill

[Michael K.]

Hi Bill,

Yes, that's exactly the video I meant. He uses the manipulator to set the height, while the X and Y positioning is done by hand. It's an interesting way of working. I'm only used to moving the diatoms around with a picking bristle.
I'll have to give it a try and see if I can get the hang of the Kemp method.

Best regards,
Michael

[anne]

Hallo Michael,
als ich bei Klaus Kemp war, hat er mir gezeigt wie er Glasnadeln gezogen hat. Er hat diese verwendet. er legte die Diatomeen auf den Objektträger mit dem von Bill beschriebenen Mikromanipulator.
Er war ein großer Künstler.
lG
anne

[Rene]

Klaus didn't want to mount on the coverslip as he couldn't control the rotation of the coverslip during mounting.
He was quite annoyed at all the remarks about it being better to mount on the coverslip directly. "I make show mounts, not resolution targets" he told me, while he was working with his microscope on the kitchen table with plastic table cloth. He wasn't a snob

René

[Michael K.]

Hallo,

Danke für die besherigen Antworten.  Im Grunde hat K.K. ja recht, komplette Legearbeiten schaut man sich meist mit niedrig vergrössernden wie dem 5er, 8er, 10er maximal dem 20er an. Da ist
es relativ egal wo sich die Diatomee im Harz befindet.  Auch das Handling ist viel einfacher.  Mir ist es schon passiert das ein gelegtes Muster, welches ich auf dem Deckglas gelegt habe, kurz vor der Heizplatte vom Objektträger gerutscht ist. Selbstverständlich landet es natürlich auf die Harz Seite... ! Irgendwie muss man ja die kleinen Glässchen händeln können, deswegen nutz ich zum Transport vom Stereomikroskop zur Heizplatte einen Objektträger.
Ich werde es mal mit "Standart" Diatomeen probieren.

Gruss
Michael



Hello,

Thanks for the answers so far. Basically, K.K. is right: you usually view complete arrangements at low magnifications—such as 5x, 8x, or 10x, or at most 20x. In that case, it doesn't really matter where the diatom is positioned within the resin. Handling is also much easier. I've had instances where an arrangement I'd placed on the coverslip slid off the slide just before reaching the hotplate. Naturally, it landed resin-side down...! You have to handle these tiny pieces of glass somehow, which is why I use a microscope slide to transport them from the stereo microscope to the hotplate.
I'll give it a try with "standard" diatoms.

Regards,
Michael

[bill2penn]

I mount on covers which are temporarily attached to a blank slide. I add a small drop of glycerin to the center of a slide that has centering rings marked on the back, then I carefully place the adhesive-prepared round coverslip on the small drop. The drop should be small enough that the glycerin does not completely flow to the edges of the cover. This way I can manipulate the slide with my fingers just like Klaus did. Once I have place the forms and set them with my breath, I can add an ink ring using the turntable and an india ink fine tip pen. I place the slide on the hotplate (150-170C) for a minute or two to dry the ink ring, then remove the slide from the hotplate and let cool. Then I add a small amount of dry toluene via micropipette to cover the forms (and check that none move!), then I add a small amount of Zrax via a different micropipette. I then place the slide on the hotplate (150-170C) and heat for 15-30 min. Remove the slide and let cool. I carefully slide the cover using the tips of small tweezers until just a portion of the cover is hanging over the edge of the slide. Then I use the tweezers to grab the cover, flip it over and place on a cleaned slide that has a centering circle on the back. Place on the hotplate for a minute or two, then cool and clean.
Bill

[anne]

Lieber Michael,
das Marmeladenbrot fällt ja auch immer auf die Marmeladenseite...
lG
anne

[Beatsy]

Hallo,

Danke für die besherigen Antworten.  Im Grunde hat K.K. ja recht, komplette Legearbeiten schaut man sich meist mit niedrig vergrössernden wie dem 5er, 8er, 10er maximal dem 20er an. Da ist
es relativ egal wo sich die Diatomee im Harz befindet.  Auch das Handling ist viel einfacher.  Mir ist es schon passiert das ein gelegtes Muster, welches ich auf dem Deckglas gelegt habe, kurz vor der Heizplatte vom Objektträger gerutscht ist. Selbstverständlich landet es natürlich auf die Harz Seite... ! Irgendwie muss man ja die kleinen Glässchen händeln können, deswegen nutz ich zum Transport vom Stereomikroskop zur Heizplatte einen Objektträger.
Ich werde es mal mit "Standart" Diatomeen probieren.

Gruss
Michael



Hello,

Thanks for the answers so far. Basically, K.K. is right: you usually view complete arrangements at low magnifications—such as 5x, 8x, or 10x, or at most 20x. In that case, it doesn't really matter where the diatom is positioned within the resin. Handling is also much easier. I've had instances where an arrangement I'd placed on the coverslip slid off the slide just before reaching the hotplate. Naturally, it landed resin-side down...! You have to handle these tiny pieces of glass somehow, which is why I use a microscope slide to transport them from the stereo microscope to the hotplate.
I'll give it a try with "standard" diatoms.

Regards,
Michael

Hi Michael,

I agree with your points about low mag photography. However, if you *do* want to use high resolution (high NA) lenses, then sticking diatoms to the coverglass gets much better results.

I usually position three 80µm diameter glass beads around the mount (stuck in the Debes' fixative) to act as spacers so diatoms don't get crushed. These beads are sold for shot blasting metal surfaces to clean them and are surprisingly evenly spherical. You buy them sized in ranges, so you have to pick out matched diameter ones to use, but they're very cheap to buy.

Here's a strew of some of the ones I bought - to show the variability within a range (40µm-120µm here). There are a few wonky ones - but you'll only pick the nice round ones out.


And here's some selected by matched sizes (with the help of an eyepiece reticle to measure them). I nearly always use 80µm diameter now as I can measure the exact same amount of mountant for everything (23µl using an adjustable micropipette for 13mm diameter slips) and get a nice tidy ring of mountant squeezing out around the edge every time.


After mounting your arrangement and drying the Debes', add the usual drop of toluene to get rid of bubbles and then the mountant (I use Darax). Dry this "face up" on the heater to get all the solvent out then allow to cool. Now turn the coverslip over and position it on a slide. Then put the "holder" on it to keep it in place (as pictured below). Heat until the mountant melts again and settles onto the slide - the coverslip won't move or rotate while melting down. The bead spacers ensure the coverslip settles flat and parallel to the slide surface so all your diatoms are at the same focus level (no refocusing when moving around the mount to view different parts). The holder is made from 3mm and 1mm silicone rubber sheet, stuck together with a high temperature gasket sealer.


If you don't want to use spacers here's a "light touch" version of the holder that does the same thing. However, if the diatoms are various thicknesses, your coverslip probably won't settle level. All the pieces were cut from 3mm silicone rubber sheet. Just move the middle piece of silicon rubber (fulcrum) along the pin to adjust the pressure applied to the coverslip. It is a tiny amount of weight though.


Hopefully the pics are enough to describe the construction and usage.

Cheers
Beats

[Michael K.]

Hallo Beats,

Danke für die Ausführungen.  Als Abstandshalter verwende ich 1mm Deckglas Streifen die ich in 3 Teile breche und am Deckglasrand wie ein Dreieck anordne, so wie es Göke beschrieben hat.
Aber das mit den Glaskügelchen ist ebenfalls eine Idee.  Ich hätte noch Füllstoff für flüssigen Kleber da, sieht aus wie weisser Sand. Es müsste auch Glas sein. 
Besteht nicht die Gefahr das das Deckglas bricht? Falls das Einbettmedium schrumpft erzeugt es einen Druck und das Kugeln nur einen winzigen Auflagepunkt haben, könnte sich dort ein Riss bilden.


Guss Michael






Hi Beats,

Thanks for the explanation. As spacers, I use 1 mm strips of coverslip glass; I break them into three pieces and arrange them in a triangle shape at the edge of the coverslip, just as Göke described.
But the glass bead idea is interesting, too. I actually have some filler material for liquid adhesive on hand—it looks like white sand. It's likely glass-based as well.
Isn't there a risk of the coverslip breaking? If the mounting medium shrinks, it creates pressure; since the beads offer only a tiny contact point, a crack could form there.

Best regards, Michael

[Beatsy]

Hi Michael,

No, there is no undue pressure, I have never had a coverslip break. Despite the smaller contact point from being a sphere, they act the same as any other spacers.

While I'm here, I had a coverslip slide off and land wet-mountant side down too. On a carpet! Just cut a small piece of silicone rubber sheet with a circular hole a bit larger than your coverslip and place that on the slide with the coverslip in the hole. The silicone is very "grippy" and won't slide around (clean with alcohol for max grip). Now your coverslip can't slip off and can be safely moved to the heater. The rubber will easily withstand the heat of cooking the mountant (I usually use 160C). When done and cooled, simply lift the rubber "safety rail" off so you can get at the coverslip with tweezers to turn it over and transfer to a clean slide for melting down.

Cheers
Beats

[Michael K.]

Hallo,


Danke für die Tips.  Den Füllstoff den ich habe ist feiner Sand, aber scharfkantig. Im Netz habe
ich nach Sandstrahlkügelchen geguckt, gibt es nur in 25kg Säcken.
Ich habe überlegt wo noch feiner Sand drin sein könnte... in Sanduhren.  Die ich hier habe beinhalten
Sand der aber nicht wirklich rund ist. Ich habe deswegen im Blindkauf ein 6er Set von Sanduhren beim grossen A bestellt.  Und siehe da dort sind kleine Kügelchen drin von sehr klein bis recht gross je nach
Laufzeit der Sanduhr.  Jetzt muss ich nur noch gucken wo die passenden drin sind.


LG
Michael

[Jürgen Boschert]

Hallo Michael,

schau mal bei Kremer Pigmente; da gibt es Glaskügelchen in verschiedenen Größenordnungen in kleinen Mengen. Du musst nur die Vollglaskugeln nehmen, auf keinen Fall Hohlglaskugeln; sonst passiert das.

[Michael K.]

Hallo Jürgen,

Ja kleine Mengen Hohlglaskugeln habe ich gefunden... als Füller für Giessmassen, Kunstharze etc.
Die nehme ich natürlich nicht. Die Kügelchen in den Sanduhren habe ich mir unter dem Stemi angesehen
die sehen voll aus. Ich werde erst mal die einzelnen Sandgrössen optisch vermessen, bevor ich eine Sanduhr
öffne.  Das ganze Set kostete 6 Euro.
Danke für den Hinweis auf Kremer Pigmente!

LG
Michael

[Jürgen Boschert]

Hallo Michael,

ich habe doch den direkten Such.Link zu Glaskügelchen bei Kremer eingestellt, da hast Du doch auch Vollglaskugeln in verschiedenen Größen.