Fluoreszenz mit Olympus BH2

mikropit · August 08, 2020, 16:04:32 NACHMITTAGS

Hallo an die Olympus Fluoreszenzexperten!
Immer wieder bewundere ich die tollen Fluoreszenzbilder von verschiedenen Forums Teilnehmern. Öfters habe ich nach der Belichtungszeit gefragt. Ich bekommen nämlich nur sehr dunkle Bilder. (trotz Rollladen runter damit kein sonstiges Licht stört)
Ich habe ein BH2 Olympus wo ich die Fluoreszenzeinrichtung auf eine 455 nm blaue 10 Watt LED (mit 50 W mit mehreren LEDS klappts auch nicht) umgebaut habe.
Der dichroitische Spiegel hat die Beschriftung G und B, ebenso der Filterschieber. Nun vermute ich, dass diese Teile nicht optimal zu meinem Blaulicht passen.
Wenn ich meine Präparate (extra welche gekauft) direkt schräg im Auflicht blau beleuchte (da habe ich eine kleine Vorrichtung gebastelt, wo ich das Licht schön fokussieren kann) bekomme ich befriedigende Ergebnisse (mit orangem Sperrfilter). In der Olympus Anleitung habe ich keine Hinweise gefunden.
Irgendwas mache ich wohl falsch. Natürlich ist die Blende offen.
Hat da jemand einen Tip?
vG Peter - mikropit

JB · August 08, 2020, 16:46:47 NACHMITTAGS

Hallo Peter,

Fuer die Problemfindung waeren aussagekraeftige einige Bilder der Auflichteinrichtung hilfreich.

Ist die hintere Linse des Objektivs ausgeleuchtet und wird die Feldblende der Fluoreszenzeinrichtung scharf in der Objektebene abgebildet?

Beste Gruesse,

Jon

peter-h · August 08, 2020, 16:53:22 NACHMITTAGS

Hallo Peter,

ist es beim BH-2 die RFL-Version? Die filter dazu habe ich im Anhang. Es kommt auch auf das Objektiv und seine NA an. Ein 10/0,25 ist nicht so berauschend, 10/0,3 sollte es schon sein. Bei mir reicht eine 3 Watt @455nm. Da es bei Olympus 2 Blauanregungen gab, kann es auch sein, dass das Anregungsfilter zu eng ist.

Gruß
Peter

mikropit · August 08, 2020, 18:29:43 NACHMITTAGS

Vielen Dank für die raschen Antworten

Jon: wenn ich unter das Objektiv ein weisses Papier lege, sehe ich den kreisrunden blauen Punkt von der LED. Wie sehe ich ob die hintere Linse ausgeleuchtet ist?

Peter: ich habe vor allem Olympus APlan 10 PL 0,25 und Dplan 20/0,4 und Zeiss Neofluar 63/0,9 und Apocromat 40 / 0,95 eingesetzt.
Wo sehe ich welche Version das ist (RFL) ?
Das Anregungsfilter kann ich ganz wegschalten aber das gibt keine Änderung.
VG

Peter Reil · August 08, 2020, 19:07:43 NACHMITTAGS

Hallo mikropit,

ohne aussagekräftige Bilder ist das ein Stochern im Nebel.... $:-\$

Freundliche Grüße
Peter

Rawfoto · August 08, 2020, 22:32:23 NACHMITTAGS

Guten Abend

Ich denke es liegt an den Objektiven, sie gehören zu keiner ,,UV" Serien ...

Liebe Grüße

Gerhard

David 15 · August 09, 2020, 09:04:15 VORMITTAG

Hallo Gerhard,

die Objektive würde ich als Übeltäter ausschließen. Die Bezeichnung "UV" bei Olympus weißt ja lediglich auf Fluoreszenzfreiheit hin und je nach Quelle auch noch auf eine erhöhte Transmission im UV Bereich. Beides ist für einfache Al-Fl bei BLAUanregung nicht von Bedeutung.

Ich habe lange Zeit mit einfachen Zeiss West Achromaten am Phomi I mit III RS Fluoreszenzkondensor und Blauanregung gearbeitet und das hat problemlos funktioniert. Die Fluoreszenz ist natürlich schwächer als bei hochaperturigen Objektiven aber die Fluoreszenz ist trotzdem hell genug.

Gerade der 40/0,95 Apochromat oder der Neofluar von Peter sollte ein sehr helles Bild liefern (entsprechendes Präparat vorrausgesetzt).

Viele Grüße
David

mikropit · August 09, 2020, 11:00:25 VORMITTAG

Hallo, ich gebe David recht. Das liegt nicht an den Objektiven. Ich bekomme ja, wie schon beschrieben, bei Vergrösserungen von 4 - 20 x bei direkter schräger Blaulichtbeleuchtung mit fokussiertem Lichtstrahl ordentliche Bilder (bei höherer Vergrösserung kann ich nicht mehr unter das Objektiv beleuchten).
Das erste Foto zeigt die Fluoreszenbeleuchtung gesamt. Beim 2. Foto sieht man den Lichtpunkt meiner Beleuchtung auf dem weissen Papier unter dem 10er Objektiv. Ich meine ich bekomme einfach zu wenig Licht und tippe immer noch auf einen nicht geeigneten dichroitischen Spiegel.
VG Peter - mikropit

David 15 · August 09, 2020, 11:42:13 VORMITTAG

Hallo Peter,

du hast die ältere Ausführung des Auflichtfluoreszenz Kondensors welchen ich auch in Betrieb habe. Was mir auf deinen Bildern direkt auffällt ist der Farbton deiner Beleuchtung. Sie wirkt für mich eher lila als blau aber das mag auch am Foto liegen. Hast du eventuell zur seitlichen Beleuchtung eine andere LED verwendet als du sie im Lampenhaus eingebaut hast ? Eine Vermutung ist, dass die Wellenlänge der von dir eingebauten LED nicht passt.

An einen nicht passenden dichroitischen Spiegel glaube ich eher nicht. Die Filter im Reflektorgehäuse sind fest eingebaut (eingeklebt), somit schließe ich einfach Mal aus, dass hier Veränderungen vorgenommen wurden.

Ich sehe auch, dass du über dem Reflektorgehäuse einen zusätzlichen Sperrfilter verwendest. Eventuell passt dieser nicht zum emittierten Licht ?

Viele Grüße
David

mikropit · August 09, 2020, 12:39:26 NACHMITTAGS

Hallo David!
Das Foto ist nicht farbgetreu. Das Blaulicht (mittelblau) hat 450 nm. Zur seitlichen Beleuchtung habe ich dieselbe LED verwendet (da habe ich schon mit dreierlei rumexperimentiert) allerdings ein 5 x Okular zur Bündelung des Lichtstrahls vorgesetzt. Ja, die Filter sind fest eingebaut. Den Sperrfilter habe ich auch schon rausgezogen (da das keine UV Beleuchtung ist, kann man das machen). Das Sperrfilter ist orangerot. Auch am Kamerabild über das Trino habe ich ein dunkles Bild. Da reichen mir kaum die 3 sec. welche ich max. belichten kann.
Nun ja, ich bin halt ein Hobbymikroskopiker und kein Experte und da hilft mir der Masch. Bau Ing. auch nicht weiter.
vG Peter

Jürgen Boschert · August 09, 2020, 12:44:15 NACHMITTAGS

Hallo Peter,

verzeih bitte, wenn ich Eulen nach Athen tragen sollte: Fokussierung und Zentrierung des Beleuchtungsstrahlenganges im Auflichtkollektor wurden exakt durchgeführt ?

Klaus Herrmann · August 09, 2020, 12:52:03 NACHMITTAGS

Das Sperrfilter müsste eigentlich eher gelb sein also OG 520.
Ist denn die Lampe richtig zentriert? Im AL-Kondensor ist doch eine Irisblende ist die geöffnet?
Die Objektivapertur macht schon viel aus bei der Intensität, aber das 40er mit 0,95 wäre ja perfekt.

Ich sehe gerade Jürgen stellt die selbe Frage. Da würde ich mal den Fehler primär erwarten.

Steht das Umschaltprisma im Tritubus auf Vis?

mikropit · August 09, 2020, 13:45:23 NACHMITTAGS

Danke für die vielen Hinweise!
Ja orangegelb ist die richtige Bezeichnung. Irisblene natürlich geöffnet. Mit den 2 vorhandenen Stellschrauben am Lampengehäuse kann ich die LED zentrieren. Natürlich ist das Bild am Trinotubus etwas heller, wenn ich nicht auf Strahlteilung schalte, sondern voll auf die Kamera.
Aber trotzdem mache ich wohl was falsch.
Ich sollte vielleicht den ganzen Aufbau zu einem Experten schleppen, aber in Oberschwaben wohin und dann noch Corona.
Danke Peter

anne · August 09, 2020, 13:53:48 NACHMITTAGS

Hallo Peter,
meine Kamera belichtet bei ISO 400 oder höher ca. 8-10 sec pro Bild!
Wenn Du nur 3 sec. belichten kannst, dann müsstest Du die ISO-Empflindlichkeit sehr hoch wählen, dann kommt aber das Problem des Rauschens.
Daher arbeite ich lieber mit langen Belichtungszeiten.

Meine Kamera sieht da auch nur schwarz, das Bild sehe ich erst, nachem ich es aufgenommen habe.

lg
anne

Klaus Herrmann · August 09, 2020, 14:12:24 NACHMITTAGS

Also die blaue LED hat 3 W der Filterblock liegt nicht mal perfekt im Max 455 nm sondern 470-490. Ich habe mit Iso 100 gearbeitet Belichtungszeit 0,8 sec.

https://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=38112.0

Also irgendwie muss da noch der Wurm drin sein. Ravensburg liegt etwas ab von unserer Strecke nach Konstanz obwohl es da sicher nicht so voll sein wird wie z.Zt in KN.

Vom 28 Sept. bis 3. Oktober sind wir in Inzigkofen, wenns nicht doch noch abgesagt wird, da könntest du vorbei kommen. Ich bring zu solchen Treffen immer meinen Reparaturkoffer mit. Wasserpumpenzange und Vorschlaghammer können wir bei Bedarf noch ausleihen.