Sterile Umgebung Improvisieren

Begonnen von crabtack, November 02, 2011, 20:43:40 NACHMITTAGS

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crabtack

Hallo!

So, der Topf kommt am Samstag an.

Nun muss ich überlegen was ich als Nährmedium nehmen kann.
Ideal wäre LB Medium abe rich habe nurnoch 5 Euro zur Verfügung dafür.
Fertig kaufen geht also nicht.
Und ich weiß nicht woher ich Trypton und Hefeextrakt bekommen kann.

Könnte für E.Coli nicht auch ein Hundefutter oder Kartoffelagar genügen?
Agar Agar habe ich noch genug da. :D

Gruß
Olaf

Hyperion

#31
Du hast 5 Euro? Ausgezeichnet!

Du gehst in den nächsten Supermarkt und kaufst dir "Rindfleisch Beinscheibe" oder "Rindfleisch Suppenfleisch".

Das ist ganz billiges Rindfleisch wo noch Knochen / Haut / Sehnen / Gefäßreste dran sind.

1) Schnapp dir ein Küchenbrett und das Fleisch und entferne das Fleisch von den oben genannten Sehnen, Haut, Knochen, Gefäßen UND FETT (WICHTIG) usw. so gut wie es geht.
2) Schneide es klein in 1,1 cm große Würfel.
3) Wiege die Rindfleischstückchen auf einer Küchenwaage und gebe sie mit der doppelten Menge (in ml) kochend heißes (! am besten aus dem Wasserkocher) Wasser in ein sauberes hohes Becherglas oder einen nicht zu großen Topf.
4) Decke das Zeug zu und lasse das ganze 12 Stunden bei Raumtemperatur ziehen (am besten über Nacht), nicht länger sonst wächst es an.
5) Koche das ganze nun auf (es muss richtig kochen!) und halte es so für etwa eine viertel Stunde am kochen, ab und an mal rühren und Deckel nicht vergessen, es soll ja nicht soviel Wasser verdampfen.
Du hast lang genug gekocht wenn das ganze nicht mehr rot vom Blut, sondern gelblich ist (das merkt man aber erst wenn man eine kleine Probe in z. B. einen Meßzylinder oder ein Reagenzglas füllt und die Fleischfasern sedimentieren) lässt. Normalerweise reicht eine viertel stunde richtig kochen aber aus.
6) Filtriere das ganze in eine Flasche (du kannst saubere ! PET Flaschen a 500 ml halbvoll befüllen) durch einen Kaffeefilter z. B. Die Groben Stücken kannst du vorher mit einem Küchensieb entfernen (und essen. In der Pfanne gebraten mit Ei, Ziwebeln und Salz, schmeckt sehr lecker).
7) Verbrauche das Zeug entweder gleich oder lagere es bei -20 °C abgefüllt und vershclossen in den Flaschen (nur zur Hälkfte bis max 3/ 4 voll) in der Tiefkühltruhe.

Du hast nun Fleischwasser mit dem du Medium machen kannst (was halbwegs definiert ist im Gegensatz zu Hundefutteragar).

Fleischextrakt Medium (für 0,5 Liter):

5 g Natriumchlorid (Speisesalz tuts auch, das billigste aus dem Supermarkt, es muss eins ohne Kalk als rieselhilfe sein, sich also klar in Wasser lösen, kein Meersalz oder sowas).
Mit Fleischwasser auf 500 ml auffüllen und alles lösen lassen.

Die Lösung auf 2 500 ml Flaschen verteilen und 3 g Agar Agar in jede geben.

Die Flaschen nicht komplett verschließen und im Dampfdrucktopf autoklavieren (aufpassen das sie nicht umfallen, notfalls noch ein paar leere Flaschen mit reintun damit der Topf voller wird), halbe Stunde nachdem der Plöppel auf höchster Druckstufe steht.

Nach der Zeit vom Herd nehmen warten bis der Druck weg ist, dann Topf aufmachen und Flaschen rausholen, bei Raumtemperatur solange stehen lassen bis man sie anlangen kann ohne sich die Finger zu verbrennen (nicht eher gießen, sonst zuviel Kondenswasser).

Den Bunsenbrenner anmachen, deine im Backofen schon vorsterilisieren Petrischalen in 4er Packs daneben stellen, die obersten drei mit dem Deckel der vierten mit einer Hand anheben und mit der anderen ~ 4-5 mm hoch Medium hineinfüllen, zumachen und die obstern zwei mit dem Deckel der vierten anheben, gießen usw.

Brenner aus und Platten über Nacht stehen lassen damit sie schon vortrocknen können. In eine Tüte packen und bis zum Verbrauch bei 4 °C im Kühlschrank lagern. (Normalrum, NICHT Kopfüber).

Vor dem Beimpfen Platten aus dem Kühlschrank auf Bruttemperatur vorwärmen lassen.




crabtack

Hallo!

Danke für die schnelle und hilfreiche Antwort.
Endlich ist mal was unkompliziert. :D

Kann ich die Petrischalen einfach auch im Dampfkochtopf Autoklaviren anstelle des Backofens?
Das mit dem Befüllen der Petrischalen verstehe ich nicht so ganz.
Kann ich auch einfach jede einzelne Platte gießen?

Gruß
Olaf

Hyperion

ZitatKann ich die Petrischalen einfach auch im Dampfkochtopf Autoklaviren anstelle des Backofens?

Nein weil sie dann zu feucht werden.

Die müssen beim Gießen schon aussemn trocken sein.
Zitat
Das mit dem Befüllen der Petrischalen verstehe ich nicht so ganz.

Klar kannst du die auch einzeln gießen, nur darfst du die Teile mit dem Flüssiugen Agar drin ja nicht mehr großartig bewegen. Wenn da Agar an den Rand / Deckel hoch schwappt kannst du sie gleich weg tun.

Also entweder a) legt du eine Schale hin, hebst den Deckel an, gießt, machst zu und legst die nächste Schale drauf.

Oder aber b) du machst eben 4er Stapel, greifst mit der Hand von oben drauf und öffnest die unterste Schale (die drei oben drüber hebst du mit an), gießt, machst zu und gehst dann eine Eben höher. Das geht schneller so.

crabtack

Ah Ok, danke für die Antwort.

Da ich mir ohnehin nur 4 Petrischalen leisten kann mache ich 2 2er Stapel.

Gruß
Olaf

Hyperion

Lol, was willst du mit vier Petrischalen?

Da müsstest du gerademal 100 ml Medium machen ausserdem sind die total schnell voll. Da kannst du gar nicht viel ausstreichen. Ich würde minimum  (wirlich aller unterst) in 10 Investieren und lieber noch ein wenig warten.

crabtack

Hallo!

Naja mit 4 kann ich immerhin schonmal üben.
Die sind halt nicht so billig 3.50 Euro pro Stück.
Aber bald ist ja Weihnachten, muss ich halt weniger Sthal und mehr Petrischalen kaufen. ;D

Gruß
Olaf

Hyperion

#37
Wie für eine Norm Glaspetrischale!!!!

Boah. Der Apotheker ist kein Idiot, der ist ein gerissener Hund und Wucherer!

Bestell dir deine Petrischalen lieber hier, der liefert auf Rechnung, wenn es unbedingt welche aus Glas sein müssen:

http://www.laborhandel-krumpholz.de/laborglas/petrischalen

Generell braucht man für normale Anwendungen keine Riesenschalen. 10 cm Durchmesser und 15 mm Höhe sollte reichen.

Da bekommst du bei og. Link 10 Stück für 10 Euro davon. (+ 3,95 Versand, aber der rechnet sich ja wenn man mal mehr bestellt). Immernoch billiger als der Wucherapotheker.

crabtack

Oh verdammt, ich Zahle also etwa 500% des Preises den ich eignetlich Zahlen müsste.
Ok, ab jetzt kaufe ich nichts mehr außer Medikamenten in der Apotheke.

Sterilisierbar bis 130 Grad.
Kann ich davon ausgehen, dass die bei langsamen Auskühlen auch mehr Aushalten?

Danke für den Link, schöne seite.

Gruß
Olaf

treinisch

Hallo Olaf,

gräme dich nicht, die Schalen bei diesem Link sind tatsächlich sehr billig.

Aber sind Deine vielleicht aus Duran? Dann wäre der Preis wieder ziemlich
gut, abgesehen davon, dass Du keine aus Duran brauchst, oder aus
Borosilikat, oder mit extra-planem Boden? Duran würde auf jeder Schale
stehen.

Mit der Temperatur bei Glas ist das so eine Sache. Generell hat der Apotheker
mit seiner Aussage nicht unrecht gehabt. Irgendwo bei 120-140°C verändert sich
das Glas dauerhaft und kann massiv an Stabilität einbüßen. Was aber, wenn Du sie
im Backofen abkühlen lässt, wie von Hyperion beschrieben, kaum auftreten sollte und
bei Petrischalen sowieso egal ist.

Ja, bei langsamem Erwärmen und Abkühlen ohne Inhalt und in trockenem Zustand
ist es kein Problem bis auf 180°C zu gehen. Das gilt für Petrischalen im Backofen.

Viele liebe Grüße

Timm
Gerne per Du!

Meine Vorstellung.

Peter V.

#40
Werter Dominik,

ZitatBoah. Der Apotheker ist kein Idiot, der ist ein gerissener Hund und Wucherer!

Du hast uns ja mal ausführlich dargelegt, woher Dein offenbar immer noch nicht überwundenes Trauma rührt, das Dich zu einem pathologischen Apotheker(innen)haß geführt hat. Bevor Du jedoch weiterhin hier herumkofferst und bei jeder sich bietenden Gelegenheit Apotheker pauschal als Idioten, Wucherer und gerissene Hunde bezeichnest, würde ich Dir dringend raten, die Probleme endlich einmal professionell aufzuarbeiten!!!

Zudem solltest Du Dich mal ein wenig mit kaufmännischen Prozessen, Preisbildung etc. auseinandersetzen, bevor Du hier weiterhin einen solchen B L Ö D S I N N verbreitest!
Apotheken haben typische Vertriebswege und beziehen ihre Artikel aus einem speziellen Großhandel für Apopthekenbedarf. Dort sind bestimmte Dinge selbst für Apotheken im Einkauf schon deutlich teurer als sie bei manchen anderen Vertriebswegen im Verkauf kosten.
Nach Deiner Ansicht soll zudem der Apotheker selbstverständlich an dem ganzen Aufwand, der er mit der Bestellung und dem Verkauf der Petrischalen hat ( was nicht sein tägliches Geschäft ist! ) nichts verdienen. Ist klar, Du arbeitest vermutlich auch für Gottes Lohn, nicht wahr?
Am Bahnhofskiosk ist die Cola auch deutlich teurer als bei Aldi!


Man kann sicher die Preisgestaltung kritisch hinterfragen, aber Deine pauschalen verbalen Kraftmeiereien finde ich einfach zum k........!

MfG Peter



Dieses Post wurde CO2-neutral erstellt und ist vegan. Für 100 Posts lasse ich ein Gänseblümchen in Ecuador pflanzen.

Mila

#41
... und die Apothekerin liest die Beiträge und hackt sich eher die Finger ab, als darauf ernsthaft einzugehen...

P.S.: Nur zur Beruhigung: trotz des Avatars => die Finger sind noch dran... ;D

Hyperion

#42
Wie wärs wenn man sich zur Abwechslung mal auf das Thema konzentrieren würde, stattdessen regen sich die Leute lieber drüber auf wie ich zu Apothekern stehe.

Der Berufsstand hats bei mir nunmal wegen diverser anderer Aktionen (und nicht der einen) und generellen Einstellungen der Apothekerkammer in bestimmten Dingen für immer versch***en. Aber das tut hier nichts zur Sache. Mit meinen Bemerkungen ab und an wird man leben müssen.

crabtack

ZitatMit meinen Bemerkungen ab und an wird man leben müssen.

Sehe ich genauso, manchmal muss man einfach Dampf ablassen.

Du könntest ja mal ein Buch schreiben, nicht so professionell wie Eckhard Bast sondern mit Improvisation und so, würde sich sicher gut verkaufen.

Oh ja, ich habe welche mit extra planem Boden genommen, andere standen aber auch nicht zur Auswahl.
Das erklärt dann wohl den Preis.

Zitatgräme dich nicht, die Schalen bei diesem Link sind tatsächlich sehr billig.
Timm, der Onlineshop ist gut, da bestelle ich mir wenn ich wieder Geld habe mal 30 Petrischalen.
Ok, danke dann erwärme ich sie langsam und lasse sie langsam abkühlen.

Gruß
Olaf

Hyperion

Genau, "Microbiology for (wannabe) Terrorists - How to prepare deadly Anthrax in your own Kitchen"  ;D

Nein, mit dem Schreiben hab ichs nicht so, dann müsste ich ja endlich mal Kommaregeln lernen.

Du hast jetzt also einen Schnellkochtopf, Petrischalen, Agar, Salz, Fleischwasser, einen Brenner usw.

Hats du auch etwas zum animpfen? Also entweder ein Becherglas mit Sterilen Zahnstochern (mit Alufolie abdecken) oder sterile Wattetupfer oder eine Impföse?

Dann hast du Flaschen aus Glas, in die du das zu autoklavierende Medium füllen kannst?

Was du noch bräuchtest wären Einmal-Latexhandschuhe, verg. Alkohol, nen Kanister entionisiertes Wasser, Erlenmeyerkolben wären noch gut.
Achja und Alufolie zum Abdecken. Die normale Haushaltsalufolie ist sehr dünn. Nimm sie daher doppelt oder kauf dir im Baumarkt die dicke Alufolie die z. B. Heizungsbauer verwenden, die riecht einfach.

Und wenn du ein paar definierte Stämme brauchst melde dich bei mir, dann kann ich dir von der Institutssammlung was (harmloses) geben.